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组培技术:一般污染问题分析

组培技术:一般污染问题分析

作者:杏耀娱乐     发布时间:2018-11-05 23:48:54    浏览量:

组织培养技术:一般污染问题分析来源:农业和林业作者:日期:2018年1月12日,组织培养室的污染源大致可分为以下几个方面:接种前污染、接种后污染、接种后污染稀释,母体传播的细菌。

组培技术:一般污染问题分析

1。接种前的污染:培养基未完全消毒。

组培技术:一般污染问题分析

1。现象

组培技术:一般污染问题分析

培养基消毒不彻底,在培养基内通常呈碟状,在培养基表面、瓶壁或瓶盖表面也有污染。

2,原因

原因可能是由于消毒器不均匀加热,过多的介质,和不干净的瓶子。

三。

将数批培养基放置1~2周,观察污染情况,评价消毒成功率。当将培养基放置一周左右并重复使用时,可以实时监测灭菌成功率,并且可以增加使用缓冲时间以应对诸如灭菌器失效之类的紧急情况。

二。疫苗接种过程中的污染:人员操作或相关灭菌设备故障

1。现象

污染是由接种引起的,污染物通常生长在培养基附近,但在少数情况下,污染物也可能随机散布在培养基表面上。

2,原因

究其原因,主要是操作人员操作不符合无菌操作要求,超净工作台高效过滤器失效,超净工作台转速过低,超净工作台表面消毒不佳,消毒效果不佳等。孕育剂离子不彻底。一般员工在组织培养工厂的污染率通常为3%左右,而当技术人员进行严格的接种操作时,污染率可以控制在1%以下。如果组织培养植物中接种物之间的污染率有很大差异,我们应该从接种过程中的污染入手,寻求解决办法。

三。

解决问题的措施是定期检查机器的过滤效果,检查机器的空气流量,规范工作人员的操作,测试高温消毒器,以及测试铁板或纸板的消毒效果。

三。接种后污染:空气或小动物在养殖过程中所造成的污染。

1。现象

污染物一般分布在培养基的表面,而不是培养物的生长。有时,当被小动物,如螨虫或蓟马引入时,在瓶子里也能看到微小的爬行昆虫。此时,细菌污染物可能从瓶盖或瓶壁向下生长,或者培养基表面可能有弯曲的轨迹(沿着昆虫爬行的足迹)。在螨污染的情况下,它们可以被观察到。瓶壁上有蜘蛛网丝。

2,原因

原因可能是孵化器清洁度差,空气流动快,灰尘飞扬较多,缓冲不良,蓟马飞进来,孵化器内人员不规则的衣物带来较多的螨虫,或者昆虫造成的污染没有定期监测。昆虫造成的污染有机会传播。

三。

首先,我们应该区分污染源。如果污染被发现是瓶子之间传播的迹象,那很可能是昆虫造成的污染。我们应该立即拧紧污染的瓶盖并清除污染的瓶子。平时要注意培训室的缓冲作用,规范员工的着装,定期清理培训室,如每周两次拖地板。臭氧可以在培养室每天晚上消毒。最有效的措施是定期检查和净化。

4。螨污染

这里我想补充一下我个人的看法。螨在一般清洁的环境中会随机出现。毕竟,人体有螨虫。

观察到螨污染时,更多未观察到的母瓶被污染。因为螨虫从瓶口爬到培养基中,所以在菌落生长之前不能观察到这一阶段。当1筐里的污染越来越多时,应该立即扔掉。

有一些螨虫不能进入瓶口螺旋的瓶中。母瓶在瓶子转动前是干净的,瓶子转动后会产生污染。

可能有少量螨,没有霉菌孢子进入瓶,这是无法观察到的。这样的奶瓶会被忽视,成为隐藏的传染源。当螨虫在瓶子里繁殖,进出瓶子时,真菌最终会被污染。

为了控制螨虫的污染,筛选是最重要的措施,药物使用的效果尚不清楚。每隔3~7天进行一次筛选操作,将整个培养过程中螨虫的污染率降至0.1%以下。然后,每周彻底清除霉菌污染,直到没有发现螨污染。

螨虫爆发时,它们通常管理不好。此时,只有一部分明显的污染被观察到。更多的瓶子有螨虫,但不容易观察到。因此,发现即使被污染的瓶子在螨虫暴发后立即被清洗,在随访中污染将继续增加。经过长期的筛选,污染物在达到高峰后将逐渐减少,估计整个螨病过程将持续2-3个培养周期。在采取良好应对措施的情况下,应在三个周期后将螨群控制在正常水平,但此后应继续采取监测措施。

4。母体载体:在组织培养物本身存在内生细菌,或者当外植体消毒时,带有轻度载体细菌的材料被保留。

1。现象

这种污染必须接近文化的表面。由于这种污染可以保留,携带细菌的组织培养物的生长通常很慢,并且很难在培养基中观察到细丝。然而,随着培养代数的增加,污染物的生长速度可能加快,污染也变得更加明显(原因可能是经过一段时间后,细菌迅速突变并占据了生长优势)。

2,原因

一般来说,植物内生植物或多或少都有。轻度污染不易检测,也不易影响文化的生长。

三。

对于内生细菌,尝试使用无内生细菌的材料,包括茎尖解毒处理。同一批母体培养物也可含有少量无内生真菌的材料,精心挑选部分材料用于繁殖,其余也可用于几代。如果内生菌不影响组织培养的生长,它们也可以被忽略。

对于轻度污染,无菌材料应尽可能仔细地选择,以集中在传播上。当然,适当的接种操作也可以控制轻微的污染,例如每次旋转瓶子时移除所有的旧组织,并且只使用新组织进行繁殖或出苗。

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