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组织培养时各种灭菌特点

组织培养时各种灭菌特点

作者:杏耀娱乐     发布时间:2018-11-02 22:36:54    浏览量:

互联网作者:日期:2012年9月11日。常用的杀菌方法可以分为物理和化学方法,即物理方法,如干热(烘焙和燃烧)、湿热(常压或高压烹调)、辐射处理(紫外线、超声波、微波)、过滤等。用大量无菌水清洗;化学方法有使用汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、乳糖水、漂白粉、次氯酸钠、抗生素、酒精化学处理。这些方法和试剂应根据不同的材料在工作中和不同的目的选择。

组织培养时各种灭菌特点

高压灭菌的原理是,在密闭的蒸汽罐中,蒸汽不能溢出,压力不断上升,水的沸点不断增加,锅内温度随之升高。在0.1 MPa的压力下,罐内的温度达到121℃,在蒸汽温度下,每一个都能迅速地被杀死。细菌及其嗜热孢子。

组织培养时各种灭菌特点

应注意彻底清除锅内的空气,使锅内的水蒸气彻底消毒。高压消毒和脱气有几种不同的方法,但目的是排出干净的空气,使锅内均匀升温,保证完全消毒。常用的方法是:关闭除气阀,通电后,当压力升至0.05 MPa时,打开脱气阀,放出空气,并等到压力上升到0.05 MPa。当压力表恢复到零时,再次关闭排气阀。

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当阀门重新通电时,压力表上升到0.1MPa,启动时间,保持压力0.1-0.15MPa,20分钟。

当压力达到0.5 MPa时,电源可被切断,蒸汽可缓慢释放。应注意不要降低压力太快,造成容器内液体的强烈减压沸腾和溢流。当压力降至零时,盖子可以打开,可以取出培养基并放置在平台上进行冷凝。一旦放置过长,由于锅炉中的负压,盖子无法打开。只要打开排气阀,压入大气,内外压平衡,盖子就可以轻松打开。

对于高压灭菌后未变质的物品,如无菌水、培养基和接种工具,可以延长灭菌时间或压力。但是,介质应严格遵守保温时间,不仅要完全压制,而且要防止介质成分或有效性的劣化降低,从而不能随意延长保温时间。

对于一些布制品,如实验室服装和口罩,也可以使用高压灭菌。洗涤、干燥后,用高压塑料袋包装,高压消毒20-30分钟。

高压灭菌前后培养基pH值下降0.2-0.3单位。高压灭菌后培养基pH值的变化方向和程度取决于多种因素。高压灭菌后pH值的变化范围与高压灭菌前用碱将pH值提高到预定值时相反。当培养基组成单一,培养基中含有高浓度或高浓度物质时,高压灭菌后PH值的变化范围不同。PH值大于或大于2个单位。环境PH值大于0.5个单位的变化可能具有显著的生理效应。

高压灭菌通常将蔗糖水解成单糖,从而改变渗透压。在8%~20%蔗糖范围内,高压灭菌后的培养基增加约0.43倍。

在高压灭菌条件下,培养基中的铁能催化蔗糖的水解,使15%-25%的蔗糖水解成葡萄糖和果糖。培养基的用量小于5.5,水解量较多。当加入0.1%活性炭时,蔗糖的水解在高压下大大提高。加入1%的活性炭,蔗糖的水解率可达5%。

1。为了防止蒸压引起的上诉,可以采取以下方式进行一些改变:

1。应注意收集高压灭菌对培养基成分影响的信息,以便及时采取有效措施。

2。在设计培养基配方时,应尽量使用效果相似的稳定试剂,并准确控制用量。例如,避免使用果糖和山梨醇,使用甘露醇,用IBA代替IAA,控制活性炭用量(低于0.1%),并注意高压灭菌条件下PH值对培养基组成的影响。

三。在准备介质时,应注意组分的适当分组和加入它们的顺序。例如,应该在最后加入磷、钙和铁。

4。应注意高压灭菌后培养基pH值的变化和动态恢复。例如,高压灭菌后,pH值通常从5.8上升到6.48。96小时后,下降到5.8左右。实验中可以掌握这条规律。

二。用于消毒灭菌的消毒设备。

在无菌操作中,镊子、剪刀、手术刀等浸泡在95%酒精中。在使用前,它们被取出并在酒精灯的火焰上燃烧。冷却后立即使用。在操作中,可使用250或500毫升宽口瓶,95%酒精可放入工具插入。

三。玻璃器皿和耐热器具用干热消毒。

干热灭菌是将烤箱加热到160~180℃杀菌,在干热条件下,细菌营养细胞的耐热性大大提高,接近孢子的耐热水平。通常,用170℃消毒90分钟。干热灭菌物品应事先清洗和干燥,工具应妥善包装,以避免灭菌。使用后再污染。耐高温塑料可用于敷料。灭菌应逐渐加热至预定温度,并在达到预定温度后记录时间。放置在烤箱中的物品数量不宜过大以防止对流和渗透。当电源在特定时间切断时,烤箱在开启前应充分冷却,以防止由于突然冷却而导致器具破裂。能源消耗太大,浪费时间。

四。热不稳定物质经过过滤和灭菌。

一些生长调节剂,如赤霉素、玉米素、脱落酸和一些微生物,不耐热,不能在高压下杀菌。通常采用过滤灭菌法。

一些化学成分在高温高压下降解,失去功效或降低其效率。高温灭菌后,GA3的活性仅为未高温灭菌的新鲜溶液的10%。高温后蔗糖部分降解为D-葡萄糖和D-果糖,果糖部分水解产生植物组织生长抑制剂。质量。高温也会使碳水化合物和氨基酸发生反应。IAA、NAA、2,4-D、激动素和玉米素在高温下相对稳定。维生素具有不同程度的热稳定性,但如果培养基的pH值高于5.5,维生素B1将迅速降解。泛酸钙、植物组织提取物等应过滤消毒。它可以在高温下灭菌,否则就会失去其功能。

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