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国兰茎尖组织培养技术

国兰茎尖组织培养技术

作者:杏耀娱乐     发布时间:2018-10-25 22:25:08    浏览量:

中国兰花茎尖组织培养技术资料来源:网络作者:日期:2012年12月24日,中国兰花芽生长期处于南方高温高湿雨季,杂菌繁殖猖獗,土壤和媒介载体尤为严重。用于接种和取样的兰花盆栽培养基应尽可能少地含有杂质,没有有机肥料,放置在透明的遮蔽处,当新芽出现时,让芽裸露在上面。从植物基部切下6-13厘米长的芽,用刮刀刮去2-3片根、赃物和外叶,彻底洗净,切下2-3厘米长的材料,用10%次氯酸盐溶液消毒10分钟。如果载体严重,则采用0 I.1%升汞和饱和漂白粉进行交叉波消毒。灭菌后,用无菌水冲洗数次,然后放在无菌滤纸上吸收干水,然后在解剖显微镜下进行无菌操作,去除顶端和腋芽。如果目的是去除病毒,茎尖应小于0.2mm,否则茎可剥去2mm以上,具有2片叶原基,有利于存活。

(1)原球茎的诱导

兰花各部位离体组织部分可诱导原球茎形成,进而分化成植株。原球茎一旦形成,可连续分化为继代培养和增殖,即建立无性系繁殖系。兰花原球茎具有旺盛的生命力和稳定的遗传特性,对兰花的快速繁殖和种质保护十分有利。

接种后,在23-25℃的黑暗中培养外植体。1-2-10个月后,可分离出一个至数个乳白色原球茎。在解剖显微镜下,观察了与桑果形状相似的球茎突起,然后变绿。培养后,外植体易于形成根茎(或树突状团块)。影响原球茎鳞茎成功诱导的因素有:

1。品种效应:不同品种由于遗传类型、内源激素和多酚的差异,诱导和启动的难度不同。

2、培养基的影响:不同品种对不同培养基的适应性不同。大花蕙兰品种比白+BA、+Na+ 5+C8+ 5和Ba+Ba+NaAI 2好。MS+Ba0.5+NaA1 10活性炭0.5%是最佳培养基。初步观察表明,兰花品种适宜于无机盐浓度低、氨氮含量高、生长素含量高的培养基。品种如&ld.;Cymbidium & rd.; & ld.;秋水仙碱& rd.;适合于无机盐浓度较高和生长素含量较低的培养基。

三。新芽分化程度和材料类型:茎尖启动率和诱导成功率均显著高于9~13cm的诱导芽,且诱导成功率最高。

4。诱导启动后褐变死亡的影响:兰花品种接种桑椹形原球茎后由于启动而存活和膨大良好,但启动后易褐变和死亡,是兰花组织培养失败的原因之一。根据四川农业科学院生物技术研究所的数据,褐变死亡人数几乎占3/4。由于兰花芽端含有较多的多酚氧化酶,通过茎段培养,如接种较大外植体、降低培养温度、暗培养、尽量减少伤口表面和加入褐变抑制剂(如芦丁、柠檬酸等抗氧化剂)等易褐变死亡。c.在培养基中,或联合应用活性。碳具有减少褐变和死亡的作用。

(2)兰花可以通过原球茎分化成植株。热带兰花鳞茎主要为球状,兰属鳞茎丛生(根状茎)。原球茎形成阶段是兰科植物大量繁殖的有利阶段,是兰科植物快速繁殖和增殖的重要环节。茎尖和侧芽接种3-6个月,根状茎形成可分为继代培养,增殖培养基W和B11为基本培养基,添加NAA1-2液体培养基较为适宜。每15天更换一次培养基。继代培养3-4次后,将培养基转移到相同的组成中,在固体培养基中加入活性炭(0.3%)和柠檬酸(500mg/1),每月一次。液体培养和固体培养交替。增殖培养,原球茎的分裂不应该太小;培养组不应该太小;培养基不应该太多;继代培养时间不应该太长,否则原球茎生长不良,甚至死亡。原球茎可以连续地分割和增殖,从而建立克隆。兰花原球茎的继代数量和时间尚有待进一步研究,但从继代3~5年的原球茎来看,仍保持正常的增殖和分裂能力。

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