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植物组培外植体消毒详解

植物组培外植体消毒详解

作者:杏耀娱乐     发布时间:2018-10-23 18:51:18    浏览量:

植物组织培养外植体消毒的详细来源:互联网作者:日期:2013年1月29日

植物组培外植体消毒详解

用于植物组织培养的外植体大多取自田间,大量的微生物附着在表面,是组织培养的主要障碍。因此,在接种和培养之前必须对材料进行消毒。一方面,消毒要求对材料表面的各种微生物进行杀灭,同时不能破坏或仅轻微损伤组织和材料而不影响其生长。因此,外植体的消毒是植物组织培养的重要组成部分。

植物组培外植体消毒详解

(1)常用消毒剂

常用消毒剂见下表。理想的消毒剂应具有良好的消毒效果,易被无菌水冲刷或自行分解,对材料损伤小,对人体及其他生物无害,来源广泛,价格低廉。

常用消毒剂的使用及效果

酒精是最常用的表面消毒剂,70%~75%的酒精杀菌效果最好,95%或无水酒精会使细菌表面蛋白质迅速脱水凝结,形成一层干膜,防止酒精继续渗透,杀菌效果好。凯西大大减少了。

酒精具有很强的穿透力,使蛋白质变性和杀菌作用。同时它还具有很强的润湿效果,可以消除材料上的空气,有利于其他消毒剂的渗透。但是,酒精对植物材料也有很大的致死作用,浸泡时间过长,会影响植物材料的生长,甚至被酒精杀死,使用时间应严格控制。但酒精不能彻底消毒,一般不单独使用,多使用其他消毒剂。

升汞

也被称为氯化汞,Hg2+可以结合负电荷的蛋白质,变性和杀死细菌。水银升液具有良好的消毒效果,但容易残留在植物材料上。消毒后,需用无菌水反复冲洗。氯化汞对环境危害很大,对人体和家畜都有很强的毒害作用。

次氯酸钠

次氯酸钠是一种很好的消毒剂。它能释放活性氯离子并杀死细菌。它的消毒能力很强,不易留存,对环境无害。但次氯酸钠溶液具有较强的碱度,对植物材料也有一定的危害。

漂白粉

漂白粉的有效成分是次氯酸钙[Ca(ClO)2],具有良好的消毒效果,对环境无害。容易吸收水分,失去有效氯,因此必须密封保存。

过氧化氢

又称过氧化氢,消毒效果好,易于去除,且不会损伤外植体,常用于叶片消毒。

苯扎溴铵

它是一种广泛使用的表面活性消毒剂,对大多数植物外植体的损害较小,杀菌效果好。

(2)消毒方法

茎、叶消毒。

消毒前,将植物组织修整,取出多余的部分,用自来水冲洗。对于一些表面不光滑或长绒毛的材料,可用来清洁洗涤剂,如有必要,可用刷子充分清洗,硬质材料可用刀刮。

消毒时在超净台上操作,用70%酒精浸泡10-30秒,用无菌水冲洗2-3次,然后根据树枝的陈旧、嫩硬程度,用2%次氯酸钠浸泡10-15分钟或用0.1%汞升浸泡5-10分钟。消毒时,应经常搅拌,使植物材料与消毒剂完全接触。如果材料蓬松,最好在消毒液中加入几滴吐温-20,并用无菌水冲洗3~5。

果蔬消毒

首先用自来水冲洗10~20min,用酒精快速冲洗。用2%次氯酸钠浸泡10分钟后,用无菌水冲洗2~3次。用10%次氯酸钠浸种20~30min,消毒5~10min可灭菌0.1%,对种皮过硬的种子,可提前除去种皮,用4%次氯酸钠浸种8~10min。

花药消毒

用于组织培养的花药大多不成熟,由花萼、花瓣或颖片保护,处于无菌状态。消毒时,用70%乙醇浸泡全芽或幼穗数秒钟,然后用无菌水冲洗2-3次,再用漂白粉浸泡10分钟,然后用无菌水冲洗2-3次。

根部器官消毒

由于这些材料生长在土壤中,表面上的细菌很大,消毒更困难。可用自来水清洗,用软毛刷洗,用刀切去受损和污染部位,然后用酒精冲洗,用0.1%汞浸泡5-10分钟或2%次氯酸钠浸泡10-15分钟,最后用无菌水冲洗3次。

操作时应根据材料的大小、嫩度、质地等差异做出判断,然后选择合适的消毒剂种类、浓度和消毒时间,不得僵硬。消毒的最好效果应该是最大限度地杀死材料上的微生物,并尽量减少对材料的损害。

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