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组织培养的方法和步骤

组织培养的方法和步骤

作者:杏耀娱乐     发布时间:2018-10-22 19:27:56    浏览量:

组织培养的方法和程序:网络作者:日期:2013年3月7日:根据培养目的选择材料,选择原则:易于诱导,细菌少。在植物组织中应选择无菌材料。在这方面,不应该从健康植物中提取材料,也不应该从伤口、疾病和昆虫中提取材料。另一方面,最好在晴天取材,最好在中午或下午,不要在雨天、阴天或露水不干的时候。因为强壮的植物和在晴天光合作用的呼吸组织有他们自己的消毒效果,这些组织通常是无菌的。培养材料消毒

组织培养的方法和步骤

从外部或室内选择的植物材料具有不同程度的微生物。一旦这些污染物被带入人类培养基中,它们就会对培养基造成污染。因此,植物材料必须经过严格的表面消毒处理,然后通过无菌程序转移到培养基中。

组织培养的方法和步骤

第一步是从收集的植物材料中去除未使用的部分,并仔细地清洗需要的部分,例如用适当的刷子。最好把材料切成合适的尺寸,即消毒容器。把自来水冲洗几分钟到几个小时。洗涤时间适合于材料的清洁度。易浮或小的材料可被洗涤成纱袋。Flushing在严重污染方面特别有用。洗涤时,可加入洗衣粉洗涤,然后用自来水冲洗洗衣粉。该洗衣粉能轻微去除附着在植物表面的污垢,去除脂质物质,便于消毒液的直接接触。当然,最理想的清洗材料是表面活性剂&唐恩。

组织培养的方法和步骤

第二步是对材料表面进行消毒。在超净工作台或接种箱内完成,准备消毒烧杯、玻璃棒、70%酒精、消毒剂、无菌水、手表等。用70%酒精浸泡10-30秒。因为酒精可以使植物材料表面湿润,70%的酒精渗透,也容易杀死植物细胞,所以渗透时间不能太长。一些特殊材料,如水果、芽、长有苞片的靴子、苞片、多鳞片的休眠芽等,主要是内部材料,只能用70%的酒精处理稍长的时间。在无菌条件下除去成品,然后乙醇蒸发后除去外层,取出内材料。

第三步是使用消毒剂。表面杀菌剂种类繁多,可根据情况选择1和2,表中示出了使用的2种。第四步是用无菌水冲洗,每次冲洗约3分钟,根据所用消毒剂的种类,冲洗约3-10次。无菌冲洗是为了避免消毒液杀灭植物细胞的副作用。注意事项:1。酒精渗透性强,年轻材料易在酒精中失去绿色,因此浸泡时间应短,以防止酒精杀死植物细胞。(2)成熟材料,特别是种子,可以浸泡在酒精中较长时间,如种子浸泡5分钟。三。氯化汞的渗透性较弱,一般浸泡约10分钟,对植物材料几乎没有损害。(4)漂白粉容易引起植物材料的褪色,所以要注意年轻材料。在消毒液中加入0.08-mdash和0.12%吐温20、80(润湿剂),降低植物材料的表面张力,达到较好的消毒效果。灭菌剂浓度(%)持续时间(min)的去除效果

次氯酸钙9~10~5~30是很好的。

次氯酸钠2~5~30是很好的。

氯化汞0.1~1~5~8是最难的一种。

抗生素4~50mg/L 30~60较好。

外植体的制备

在无菌环境中,用无菌刀、剪刀、镊子等剥去芽鳞、嫩枝和种皮胚乳。树叶不必剥去。严禁用手触摸材料。

接种与培养(1)接种

在无菌环境中,切下的外植体立即嫁接在培养基上,每瓶接种1-2次,以防止交叉污染。(二)密封

接种后,瓶子和管子应使用无菌棉或密封,盘子应使用无菌盘子密封。(三)温度

大多数培养基应保持在25℃左右,但应根据花的种类和材料的不同部位进行不同的处理。

增殖

外植体的增殖是组织培养的关键阶段。为了扩大成苗后的繁殖系数,需要进行继代培养。将材料的分株或片段转移到增殖培养基中,增殖培养基一般在分化培养基上进行改良以提高增殖率。增殖约1个月后,可在可见条件下再次增殖。

生根诱导

继代培养的不定芽和侧芽通常无根,必须转移到生根培养基中进行生根培养。在1个月内可以获得结实的根。

组培苗试管苗从无菌状态进入光照、温度、湿度等自然环境时,必须进行回火。一般来说,在移栽之前,打开栽培容器,将室内的自然光降低3天,然后取出幼苗,用自来水清洗根系上的养分,然后移栽到制备的基质中,所述基质是:使用前最好消毒。在移栽前,应加强遮荫和水分管理,以保持较高的空气湿度(大约98%的相对湿度),但基质不应过于潮湿,以防止幼苗腐烂。

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