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组培苗的褐化问题

组培苗的褐化问题

作者:杏耀娱乐     发布时间:2018-10-22 19:24:37    浏览量:

组织培养苗的褐变:网络作者:日期:2013年3月08日:多种植物含有大量的多酚化合物。切芽创伤激活组织中多酚氧化酶,将多酚氧化成棕色醌,导致多酚的形成。Browning在外植体的切口处发生,并渗透到培养基中,导致培养基呈褐色。因此,它严重影响了文化的生长和分化,甚至导致了文化的死亡。

组培苗的褐化问题

影响褐变的因素很多。褐变程度受植物褐变基因型、外植体来源和生理状态、培养基组成等因素的影响。通常,木本植物外植体容易发生褐变,特别是在成年树中。培养基中苯酚含量过高会导致褐变,过量的无机盐和肌醇也会加重外植体的褐变。6苄基氨基嘌呤(6-BA)和激动素(KT)也具有诱导褐变的作用。强光和高温也促进褐变。

组培苗的褐化问题

为了防止外植体褐变,需要选择酚类化合物含量低的实验材料,选择无机盐含量低、不含肌醇的培养基,在弱光或黑暗条件下培养。

组培苗的褐化问题

在培养基中加入抗氧化剂是防止褐变的有效方法。常见的抗氧化剂有抗坏血酸(VC)、柠檬酸、半胱氨酸、二硫代苏糖醇和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。外植体可以用抗氧化剂溶液预处理或在抗氧化剂溶液中切割和剥离。必要时还可以使用几种抗氧化剂。抗氧化剂也可以添加到培养基中。另一种方法是在培养基中加入0.5-1%的活性炭,以吸收对生长有抑制作用的褐色醌。应注意的是,活性炭还可以吸附培养基中的激素,影响茎尖的分化与生长,因此在使用活性炭时,需要适当提高培养基中激素的浓度。另一种方法是连续地将培养物(每隔1-2天)转移到新鲜培养基中,以避免旧培养基中褐色物质的不利影响。这种方法在使用液体介质时是非常有效的。

1。在培养基中加入活性炭可以防止植物组织中酚类物质的排泄和褐变和老化。它对形态发生和器官形成有良好的作用。一般认为,活性炭主要吸附非极性物质和颜料大分子,可减少某些有害物质的影响,但比吸附的选择性很差,吸附力随温度降低而增大,吸附量随温度的升高而增加。当温度较高时,力减弱,甚至解吸。浓度一般为0.5-10g/L。添加活性炭使培养基变黑有利于某些植物的生根。大量的活性炭会削弱琼脂的固化能力,因此应添加琼脂。非常细的活性炭容易沉淀,所以当琼脂即将凝固时,需要轻轻摇动培养瓶。

2。接种时,植物外植体的切割表面会渗出酚类物质。在空气中暴露于氧气后,它们将被氧化成相应的醌,产生可见的棕色、棕色或黑色,这就是所谓的&ld.;苯酚污染&rd.;。木本植物,尤其是热带木本植物和一些草本植物,这种现象更为严重。常用的预防措施如下:

尝试使用抗酚类药物(半胱氨酸及其盐酸盐、二硫代磺酰氯、谷胱甘肽、抗坏血酸等)。这种药物的浓度为50-200mg/L。用消毒液清洗新切外植体的伤口表面,或添加固体培养基的表面,或将新切外植体浸泡在伤口表面一定时间。

适当降低介质温度。

接种Ct后,在一定时间内进行暗培养。

d.立即转移到新鲜培养基。

选择外植体部位。

有经验的人的明智的评论:

1。在易褐变作物的组织培养过程中,预培养(即在基本培养基中培养)应进行2-3天(如果分泌物过多,例如使用佛罗里达魔芋球茎进行组织培养,则应延长预培养时间,培养基应为:改变多次,然后用激素培养在培养基上。

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